THP-95人单核细胞白血病细胞/STR鉴定

THP-95人单核细胞白血病细胞/STR鉴定

细胞介绍

该细胞对乳汁珠和激活的红细胞有吞噬作用，无表面和胞质免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA诱导单核细胞分化。

细胞特性

1） 来源：急性单核细胞白血病，单核细胞

2） 形态：单核细胞，悬浮

3） 含量：>1x106 细胞数

4） 规格：T25瓶（15ml离心管）或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）复苏的存活细胞15mL离心管常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理

1） 收到细胞后请勿拆除封口膜，75%酒精消毒擦拭瓶壁将15mL离心管置于37℃培养箱放置约1-2h，若发现离心管破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在细胞移入58个新的T25培养瓶后，在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚移入培养瓶的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

THP-95人单核细胞白血病细胞/STR鉴定

一．培养基及培养冻存条件准备

1） 准备RPMI-1640（推荐iCell-0002）培养基；优质胎牛血清，10%；0.05 mM β－巯基乙醇(细胞培养级 推荐：iCell-8211)；双抗，1%。

2） 参考传代比例：传代时控制细胞密度在2-4 ×105cell / mL，并在细胞生长至8-10 ×105cell / mL时进行传代。

3） 参考换液频率：传代时换液

4） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

5） 冻存液：完quan培养液95%，DMSO 5%（使用该冻存液后，按照我库的经验复苏存活率约50%，复苏后需要额外培养7-10天才能恢复生长）

6） 【注意事项】：

该细胞为悬浮细胞，根据培养经验以及客户的反馈，传代时使用【半换液法】对细胞状态较为有利，因此我库建议您使用【半换液法】进行传代。

1. 您在收到我们提供的用15mL离心管（充液为完quan培养基）发货的细胞后，请不要通过离心的方式收集细胞，可以先准备两个新的T25培养瓶，然后将细胞混合均匀后移入两个新的T25培养瓶中，补加培养基到10ml。放入到37℃培养箱中。

2. thp-1悬浮细胞。该细胞在培养时更喜欢温和处理，培养时尽量少对细胞进行离心处理以此造成对细胞的伤害。换液时不要全培养基更换，建议您使用【半换液法】进行传代，添加细胞培养基以稀释细胞至维持密度即可。

3.  细胞对血清质量较为敏感，我库建议您使用进口大品pai优质血清进行培养。FBS不要灭活，如果细胞生长缓慢请尝试使用其他FBS或暂时将FBS浓度增加到20%

4.  该细胞的培养液中需添加β-巯基乙醇（细胞培养级别），若不添加，可能会对细胞状态造成影响。

β-巯基乙醇的稳定性有限，不可将β-巯基乙醇添加到完quan培养基中长期储存，在每次传代或液体添加时再添加β-巯基乙醇。

β-巯基乙醇（2-qiu基乙醇）被添加到淋巴细胞或其他细胞培养物中，因为在培养基中使用的FBS中氨基酸半胱an酸供不应求，而胱an酸则很多。有些细胞（例如T细胞）无法将半胱an酸转运到细胞质中，必须将其转化为半胱an酸。β-巯基乙醇将胱an酸还原为可被细胞转运的形式，然后转化为细胞生长所需的半胱an酸。  β-巯基乙醇还是一种还原剂，可以分解培养中细胞产生的许多有毒代谢产物，从而改善细胞周围的环境。

5.  该细胞对细胞密度较为敏感，培养、传代时请注意保持细胞密度在合适的范围（具体请参考细胞说明书）。

6 . 该细胞冻存后复苏率较低，冻存时请酌情提高细胞量。

7 .通常情况下可以通过向正在生长的细胞中添加完quan培养基来维持细胞的生长，每7天可以将细胞离心并重悬于新配的培养基中，来完成细胞的全换液。

ATCC有关thp-1细胞保持细胞活力的说明

（频繁的细胞计数是监测thp-1的最佳方法。这些细胞应该每2至3天通过向烧瓶中简单加入少量新鲜培养基（使它们具有条件培养基）来培养。您不需要每次都离心细胞并重新传代。当在我们的实验室中培养时，到第2天，细胞通常可以扩增到具有更多培养基的更大的烧瓶中。当细胞密度达到8×10 18个活细胞/ ml时需要进行传代。不允许细胞密度超过1×10（6）活细胞/ ml。）

二． 细胞处理：

1） 冻存细胞的复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完quan培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完quan培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完quan培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2） 细胞换液: 通常情况下可以通过向正在生长的细胞中添加完quan培养基来维持细胞的生长，每7天可以将细胞离心并重悬于新配的培养基中，来完成细胞的全换液。

3） 细胞传代：传代时控制细胞密度在2-4 ×105cell / mL，并在细胞生长至8-10 ×105cell / mL时进行传代。

4） 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。    

1，细胞冻存时，取上清，可使用血球计数板计数。

2，4min ，1000rpm 离心去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，根据细胞数量加入冻存液，轻轻混匀，DMSO终浓度为5%，细胞密度2x106/支，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。