人宫颈癌癌细胞HELA培养步骤是怎样的？

　　人宫颈癌癌细胞HELA培养步骤是怎样的？

　　

　　1、培养基及培养冻存条件准备：

　　

　　（1）准备RPMI-1640培养基；优质胎牛血清，10%；谷氨酰胺，2mM；双抗，1%。

　　

　　（2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

　　

　　（3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

　　

　　2、细胞处理：

　　

　　（1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

　　

　　（2）HeLa人子宫颈癌细胞/STR鉴定/镜像绮点（iCell）传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　
 

　　对于人宫颈癌癌细胞HELA贴壁细胞，传代可参考以下方法：

　　

　　1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　

　　2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

　　

　　3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

　　

　　4、收到细胞后传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。

　　

　　人宫颈癌癌细胞HELA细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。