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大鼠心肌细胞H9C2是原始克隆细胞系的亚克隆,该细胞系由Kimes.和Brandt.从胚胎BD1X大鼠心脏组织获得,并显示出骨骼肌的许多特性。这个细胞株中的成肌细胞能融合形成多核的肌管,并对乙酰胆碱的刺激发生反应。如果培养基中的血清浓度下降到1%,融合发生得很快。
大鼠心肌细胞H9C2用于大鼠心肌细胞Hsp60/Hsp10的表达及抗热应激损伤机理研究。
通过对大鼠和离体培养的鼠源H9C2心肌细胞进行不同时间的热应激处理,拟动态观察和了解热应激大鼠心肌细胞中Hsp60及其相应mRNA的转录和表达水平,以及Hsp60在体内、外心肌细胞中的定位和分布等特点,研究热应激过程中Hsp60的变化规律与大鼠心肌细胞热应激损伤的相关性,探讨Hsp60的组织细胞保护机制。
为研究热应激对体内、外大鼠心肌细胞造成的应激性损伤及其程度,本试验通过病理学检测,观察了受试大鼠心肌细胞和鼠源H9C2心肌细胞在遭受不同时间的热应激处理后所呈现的应激性损伤变化。试验结果显示,热应激处理初期,受试大鼠的呼吸频率加快,被毛粗乱,烦躁不安,随后大量出汗,俯卧少动。待热应激处理至60min时出现大鼠的热应激猝死,热应激处理100min后,50%的受试大鼠猝死,热应激处理2h内,100%的受试大鼠发生猝死;离体培养的H9C2心肌细胞在遭受热应激的时间达60min时,细胞的活力和存活率开始显著下降,热应激处理240min后,约50%的H9C2大鼠心肌细胞死亡。
说明离体培养的大鼠心肌细胞H9C2对热应激的耐受时间更长;组织病理学结果显示,热应激处理20min后大鼠心肌细胞肿胀,心肌细胞质浑浊,呈现明显的颗粒变性。热应激处理40min组大鼠的部分心肌细胞发生明显的颗粒变性,细胞质嗜酸性显著增强。热应激处理至100min组大鼠的心肌细胞断裂较为明显,心肌细胞核浓缩;细胞病理学结果显示,20min热应激处理组H9C2大鼠心肌细胞的体积肿大,形态变圆,细胞浆内出现少量的红染颗粒。40min热应激处理组心肌细胞的胞浆内出现较多的红染颗粒。60min热应激处理组H9C2大鼠心肌细胞出现脱落现象,细胞形态变圆且细胞边缘出现不规则的突起,细胞体积显著变大,胞浆内出现大量密集分布的红染颗粒。
热应激导致的大鼠心肌细胞和离体培养鼠源大鼠心肌细胞H9C2的病理学变化均随着热应激处理时间的延长而加剧,但离体培养心肌细胞表现出更强的热应激耐受性。为研究动物心肌细胞内Hsp60表达变化在热应激性心肌损伤以及动物猝死中的作用,本试验通过热应激过程中体内、外大鼠心肌细胞中Hsp60及其相应mRNA的表达水平和在细胞的定位等进行了动态观察,并对Hsp60表达改变与心肌的热应激损伤的相关性进行了比较分析。