说说大鼠心肌细胞H9C2处理和传代方法

　　大鼠心肌细胞H9C2是原始克隆细胞系的亚克隆，由Kimes和Brandt组成，从胚胎bd1x大鼠心脏组织中获得，表现出骨骼肌的许多特征。该细胞系中的成肌细胞可以融合形成多核肌管并对乙酰胆碱刺激作出反应。如果培养基中的血清浓度下降到1%，融合就会迅速发生。

　　

　　大鼠心肌细胞H9C2处理：

　　

　　1、细胞复苏：将装有1ml细胞悬液的冷冻管于37℃水浴中摇匀解冻，加入4ml培养基混匀。1000转离心4分钟，弃上清，加入1-2ml培养基，吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px培养皿中，加入约8ml培养基培养过夜）。第二天，换液并检查细胞密度。

　　

　　2、细胞传代：如果细胞密度达到80%-90%，就可以进行传代培养。

　　

　　大鼠心肌细胞H9C2传代方法：

　　

　　1、弃去培养上清，用不含钙镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。

　　

　　2、在培养瓶中加入2ml消化液（0.25%trypsin-0.53mmedta），放入37℃培养箱消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况。如果大部分细胞变圆脱落，迅速收回控制台，轻敲培养瓶数次，加入少量培养基终止消化。

　　

　　3、按6-8ml/瓶加入培养基，轻轻打匀，吸出，1000rpm离心4分钟，弃上清，加入1-2ml培养基吹匀。

　　

　　4、接受细胞后的一次传代，建议将细胞悬液按1:2的比例分装到装有6ml培养基的新培养皿或瓶子中。建议冷冻7840个备用，后续传代根据实际情况按1:2至1:5的比例进行。

　　

　　5、细胞冷冻保存：当细胞生长良好时，可以冷冻保存。