大鼠心肌细胞H9C2该怎么进行细胞处理？

　　大鼠心肌细胞H9C2是源自胚胎大鼠心脏的大鼠心肌细胞，具有许多骨骼肌特征。该细胞系中的成肌细胞可以融合形成多核肌管，并对乙酰胆碱刺激作出反应。如果培养基中的血清浓度降低到1％，融合会很快发生。那么细胞该怎么处理呢？
 

　　1、复苏细胞：将装有1ml细胞悬液的冷冻保存管放入37℃水浴中（水面应低于冷冻保存管的盖部分）并摇匀并融化，然后将其转移到装有4ml培养基的15ml离心管中。并混合均匀。以1000rpm离心4分钟，弃去上清液，加入1ml培养基并充分吹扫。然后将所有细胞悬浮液转移至含有5ml培养基的培养瓶中过夜培养。第二天，更换液体并检查细胞密度。

　　2、细胞传代：如果大鼠心肌细胞H9C2的密度达到80％-90％，则可以进行传代培养。

　　（1）丢弃培养上清液，并用不含钙或镁离子的PBS润湿细胞1-2次。

　　（2）在培养瓶中加入2ml消化液（0.25％胰蛋白酶-0.53m培养基），在37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞的消化情况。如果大多数细胞变圆形并脱落，请迅速将其带回手术台，轻按培养瓶几次，然后加入3ml培养基终止消化。

　　（3）轻轻吹动后，将其吸出，移入15ml离心管中，以1000rpm离心4分钟，弃去上清液，加入1ml培养基，并均匀吹扫。

　　（4）转移到制备的含有5ml培养基的t-25烧瓶或含有14ml培养基的t-75烧瓶中。

　　3、细胞冻存：大鼠心肌细胞H9C2生长良好时可以冷冻保存。冻结贴壁细胞后，应将其消化并计数。根据细胞传代方法的1-3步进行消化，并使用血清进行悬浮。直接计数悬浮细胞，离心，重悬血清，并加入DMSO至终浓度10％。加入DMSO后，应迅速混合，并按照每1毫升的量将其分配到冷冻储存管中。