人宫颈癌癌细胞HELA培养基及培养冻存条件准备

　　人宫颈癌癌细胞HELA培养基及培养冻存条件准备：

　　

　　1、准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，90%；北美胎牛血清(UnitedStates，GIBCO，货号16000-044)，10%。

　　

　　2、培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

　　

　　3、冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 

　　

　　人宫颈癌癌细胞HELA处理：

　　

　　1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

　　

　　2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　

　　对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

　　

　　（1）弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　

　　（2）加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。

　　

　　（3）轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。

　　

　　（4）移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。

　　

　　3、人宫颈癌癌细胞HELA冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行，最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中。