你真的了解人脐静脉细胞HUVEC实验步骤吗？

　　人脐静脉细胞HUVEC是一种来源于脐带组织的干细胞。它是脐静脉的重要细胞之一，在理论上可以无限期地通过。因此，人脐静脉内皮细胞（HUVEC）经常用于血管内皮细胞实验，而不是静脉内皮细胞或动脉内皮细胞。脐静脉内皮细胞易于获得且来源充足，因此，脐静脉内皮细胞经常用于血管内皮研究。那么，您真的了解它的培养实验步骤吗？
 

　　1、将15-20cm长的新生儿脐带储存在无菌PBS溶液中。（注意：应在4℃下保存24小时，在室温下保存不超过6小时，否则将被丢弃。）

　　2、将钝针插入脐静脉管，并用无菌PBS溶液冲洗3-5次，直到将脏血洗净为止。

　　3、用手术钳夹住脐带下端，添加15ml胶原酶（1mg/ml）在室温下消化15-20分钟，并不时摇动脐带。

　　4、消化后，松开下部的手术钳，将消化液倒入50ml无菌离心管中，并用无菌PBS溶液冲洗脐带2-3次。

　　5、离心收集的液体（2000rpm）3分钟。

　　6、除去上清液，加入10mlM199培养基（添加10u/mlbFGF），用肘部吹动细胞，将所有液体转移到装有明胶的培养瓶中，并在37℃下培养。（注：在每个培养瓶中加入3-4ml无菌1％明胶溶液，充分摇动以使明胶溶液*覆盖瓶底，并在37℃下孵育至少2小时。使用前将明胶溶液倒入。明胶涂层有助于细胞粘附。）

　　7、将人脐静脉细胞HUVEC培养24小时后，倒出培养基并用无菌PBS溶液洗涤2-3次。洗去红细胞和死细胞，并加入10ml新鲜的M199培养基。

　　8、应每2天更换一次介质（每次应更换2/3的介质）。

　　9、培养5-7天后，细胞可以生长到80-90％的单层，然后可以传代。

　　10、倒出培养基，用无菌PBS溶液洗涤2-3次，添加2-3ml消化液（0.25％胰蛋白酶+0.1％EDTA）消化细胞。在显微镜下观察。一旦细胞变圆，添加2-3次含血清的DMEM培养基以终止反应。

　　11、用弯头吹干细胞，然后将消化的细胞以2000rpm的速度转移到50ml无菌离心管中3分钟。

　　12、倒出上清液，加入10ml新鲜培养基。通常，可以在一瓶中传代3-4瓶细胞，然后据此传代培养。

　　13、人脐静脉细胞HUVEC通常传代2-3代（约20天）用于各种实验。